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Plasmid DNA
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產品說明
Plasmid DNA 產品分為三大類,分述如下:

  1.  VSV-G-pseudotyped lentivirus 包裹質體 (package plasmid)。其中,pCMVDR8.91提供包裹所須的Gag、Reverse Transcriptase與Rev蛋白;而pMD.G則提供VSV套膜蛋白 (Vesicular Somatitis Virus envelope protein) 以取代HIV的套膜蛋白。pAS2.EGFP.puro轉移質體提供做為包裹病毒時之正對照組 (positive control),將轉染後之細胞培養液感染宿主細胞,如細胞會表達YFP螢光蛋白,表示pCMVDR8.91、pMD.G、與pAS2.EGFP.puro等三質體轉染細胞後產生具感染力的VSV-G-pseudotyped lentivirus。

  2.  Lentivirus-based shRNA表達轉移質體 (pLKO_AS1系列質體)。請見質體資訊詳細說明。

  3.  Lentivirus-based cDNA或基因表達轉移質體 (pLKO_AS2系列質體)。此系列質體皆為bicistronic mRNA expression vector。第一個蛋白由CMV啟動子轉錄之cap-dependent mRNA轉譯;第二個蛋白則以EMCV的IRES(cap-independent)調控轉譯。Hygromycin,neomycin,zeocin,puromycin,blasticidin,及 EGFP等五基因/ selection markers,已分別接入pLKO_AS2之EMCV IRES後端,得到五種pLKO_AS2之衍生物。因此,此五種selection markers配合VSV-G-pseudotyped lentivirus感染細胞的方式,可以快速的得到細胞穩定株 (stable cell line)。

  #   各個質體說明請見檔案下載區 > Vector資訊。Vector資訊提供質體map、質體說明、及質體"Features"

    購買pLKO_AS2.hyg, pLKO_AS2.neo, pLKO_AS2.puro, pLKO_AS2.zeo隋貨附送可表達EYFP相對應的質體,如購買pLKO_AS2.hyg則送pAS2.EYFP.hyg。

技術支援

  1.   shRNA construct

    ●  shRNA construction-I: PCR method (Protocol : shRNA construction PCR method)

    ●  shRNA construction-II: annealing method (Protocol : shRNA construction annealing method)

    ●  Method of cloning shRNA using selection marker other than puromycin (Protocol : Method of cloning shRNA using selection marker other than puromycin)

  2.   sticky_end PCR,請參閱 (Protocol : sticky_end PCR

  3.  Sequencing Primer,請參閱 (Protocol : Sequencing Primer

  4.  Purification of Plasmid DNA,請參閱 (Protocol : Purification_of_Plasmid_DNA

  5.  Suggested Competent Cell:One Shot Stbl3 Chemically Competent E. coli (invitrogen) 

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