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VSV-G-pseudotyped lentivirus
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產品說明
本核心設施提供高力價、可表達shRNA的VSV-G pseudotyped lentivirus,此類病毒具廣泛細胞向性,可感染大部分實驗室培養的哺乳類細胞株。請參閱TRC已測試可感染的細胞株: ( TRC Protocol : Infectable cell lines for lentivirus)

各產品簡介如下:
  1.   盤式VSV-G pseudotyped lentivirus (C6-2)

產品說明:依照TRC基因功能分類,將具相同標地基因的shRNA clones挑選出並整合在一起,如:kinase and phosphatase(激酶與去磷酸酶),並製備成感染細胞後可表達shRNA 的VSV-G pseudotyped lentivirus。而 control virus set則是含有85株不會標地人類與老鼠基因的shRNA,適用於RNAi實驗的負對照組 。 

產品規格:病毒存放於96孔盤,各孔洞帶有特定的shRNA,含量為60 mL,每盤約有87株不同的shRNA。

產品應用: RNAi arrayed screen

  2.   混合型VSV-G pseudotyped lentivirus (C6-3)

產品說明:依照TRC基因功能分類,將具相同標地基因的shRNA clones挑選出並整合在一起,如:kinase and phosphatase (激酶與去磷酸酶),並製備成感染細胞後可表達shRNA 的VSV-G pseudotyped lentivirus,並將約可標地180個基因的病毒混合成單管。 

產品規格:病毒存放於冷凍管內,每管約有900個shRNA clones,含量為1 mL。

產品應用:RNAi pooled selection

  3.   混合型82K Human VSV-G pseudotyped lentivirus (C6-10)

產品說明:本產品主要收集針對TRC1 16,368人類基因(約81,925shRNA clones) 製備成感染細胞後可表達shRNA 的VSV-G pseudotyped lentivirus (詳細資料請參考:82K Human pooled lentivirus library)。

產品規格:病毒存放於冷凍管內,每管約有8500個各式shRNA clones,含量為0.2 mL,病毒力價約5X108 RIU/ml,共10管。

產品應用:RNAi pooled selection

  4.   單株VSV-G pseudotyped lentivirus (C6-4)


 shLuc virus

產品說明:此病毒製備自 TRCN0000072246 與其它shRNA 庫中的病毒具有相同的架構,能針對螢火蟲冷光酶(Firefly luciferase gene) 做專一性抑制。

產品規格:病毒存放於冷凍管內,每管含量為1 mL。 

產品應用:

     ●  以螢火蟲冷光酶做為報導基因的系統中,此病毒可作為positive control。

     ●  而在其他不具有螢火蟲冷光酶的系統中,可作為 negative control。

     ●  可作為定量病毒時的標準病毒 (Standard virus),詳盡的病毒相對定量說明請參考(TRC protocol : Estimation of lentivirus titer)。

     ●  可測試實驗細胞株對VSV-G-peudotyped lentivirus的感受性 (susceptibility),做法與定量病毒相對量的實驗相同。

 GFP virus

產品說明:此病毒與其它shRNA 庫中的病毒具有相同的架構,感染細胞後能表現綠螢光蛋白(green fluorescent protein)。 

產品規格:病毒存放於冷凍管內,每管含量為1 mL。  

產品應用:經此病毒感染後,可由綠螢光訊號之判斷以得知實驗用的細胞株是否被慢病毒感染。附註:此病毒帶有puromycin selection marker,故可在puromycin篩選下存活。

使用需知

操作規範
請以P2 Plus操作規範執行實驗,接觸過病毒的試管等耗材,皆須浸泡於10%漂白水20分鐘後,才能自生物安全櫃移出並進行滅菌處理;詳細的操作規範請參閱 生物安全守則

病毒的保存
建議於第一次解凍後,視實驗需要進行小量分裝並保存於-80℃冰箱,以減少病毒活性的損失。此外,管裝病毒建議於冰上或4℃解凍;盤式病毒於4℃或室溫下解凍,解凍後採低速離心,再進行開封,以防止污染。有關解凍次數對病毒活性的影響,請參閱【常見問題>慢病毒相關 - Q2如何保存VSV-G pseudotyped lentivirus】。實驗過程中,病毒可置於室溫,一旦實驗完成,建議立即將病毒置於-80℃冰箱保存。 

技術支援
  1.   病毒感染法 (TRC protocol : Lentivirus infection V3, V4; For pooled virus screen : Large scale infection)
  2.   病毒力價測量法

   ●   RIU (Relative Infection Unit) Method (protocol: Estimation of lentivirus titer RIU)

   ●  CFU (Colony Formation Unit) Method (protocol: Estimation of lentivirus titer CFU)

   ●  GFP (Green Fluorescent Protein) Titering Method (protocol: Estimation of lentivirus titer GFP)

  3.   不同細胞株之病毒力價轉換法
請參閱【常見問題>其他 - 病毒力價測定方式比較RIU vs. CFU

 
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