產品說明
Plasmid DNA 產品分為三大類,分述如下:
1. VSV-G-pseudotyped
lentivirus 包裹質體 (package plasmid)。其中,pCMVDR8.91提供包裹所須的Gag、Reverse
Transcriptase與Rev蛋白;而pMD.G則提供VSV套膜蛋白 (Vesicular Somatitis Virus
envelope protein) 以取代HIV的套膜蛋白。pAS2.EGFP.puro轉移質體提供做為包裹病毒時之正對照組
(positive
control),將轉染後之細胞培養液感染宿主細胞,如細胞會表達YFP螢光蛋白,表示pCMVDR8.91、pMD.G、與pAS2.EGFP.puro等三質體轉染細胞後產生具感染力的VSV-G-pseudotyped
lentivirus。
2. Lentivirus-based
shRNA表達轉移質體 (pLKO_AS1系列質體)。請見質體資訊詳細說明。
3. Lentivirus-based
cDNA或基因表達轉移質體 (pLKO_AS2系列質體)。此系列質體皆為bicistronic mRNA expression
vector。第一個蛋白由CMV啟動子轉錄之cap-dependent
mRNA轉譯;第二個蛋白則以EMCV的IRES(cap-independent)調控轉譯。Hygromycin,neomycin,zeocin,puromycin,blasticidin,及
EGFP等五基因/ selection markers,已分別接入pLKO_AS2之EMCV
IRES後端,得到五種pLKO_AS2之衍生物。因此,此五種selection
markers配合VSV-G-pseudotyped lentivirus感染細胞的方式,可以快速的得到細胞穩定株 (stable
cell line)。
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各個質體說明請見檔案下載區 > Vector資訊。Vector資訊提供質體map、質體說明、及質體"Features"
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購買pLKO_AS2.hyg, pLKO_AS2.neo, pLKO_AS2.puro,
pLKO_AS2.zeo隋貨附送可表達EYFP相對應的質體,如購買pLKO_AS2.hyg則送pAS2.EYFP.hyg。
技術支援
1. shRNA
construct
● shRNA construction-I: PCR method (Protocol
: shRNA construction PCR method)
● shRNA construction-II: annealing
method (Protocol
: shRNA construction annealing method)
● Method of cloning shRNA using
selection marker other than puromycin (Protocol : Method of cloning shRNA using
selection marker other than puromycin)
2. sticky_end
PCR,請參閱 (Protocol :
sticky_end PCR)
3. Sequencing
Primer,請參閱 (Protocol :
Sequencing Primer)
4. Purification of
Plasmid DNA,請參閱 (Protocol
: Purification_of_Plasmid_DNA)
5. Suggested
Competent Cell:One Shot Stbl3
Chemically Competent E. coli (invitrogen)